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重庆金时代生物告诉你细胞培养注意事项

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重庆金时代生物告诉你细胞培养注意事项

发布日期:2018-06-05 作者: 点击:

  细胞培育试验所需的物品、器件应进行严厉的灭菌或购买无菌的一次性物品。玻璃瓶可拧松瓶盖灭菌(指高压蒸汽灭菌,以下同)或用铝箔纸包住瓶口,和瓶盖别离灭菌。其它玻璃和金属器件用铝箔纸包裹进行灭菌。玻璃吸管应塞上棉花球灭菌,然后置于烘箱中烘干。不适于进行高压灭菌的瓶塞等其它物品,可浸泡在70%酒精中进行灭菌,然后在超净作业台上吹干。细胞培育液和其它不适于高压灭菌的溶液,应经过过滤(选用0.22μm的孔径的滤膜)灭菌。无菌培育室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖地上一次,并用紫外线照耀灭菌30分钟。超净作业台每次运用前用70%酒精擦拭,然后紫外线照耀30分钟。


  进入无菌操作室要求穿着无菌作业服、作业帽、口罩。开端作业前用70%酒精对手、前臂及乳胶手套进行消毒。细胞培育等操作应在超净作业台或有空气过滤器的空间内进行。操作前点着酒精灯,细胞培育的一切操作,如翻开或关上试管或培育瓶盖等,都要接近酒精灯并经过短时刻的灼烧。烧过的试验器械,冷却后才干运用。已吸过培育液或其它有机液体的吸管不得再用火焰炙烤。不同液体别离用不同的吸管汲取,不能混用。开盖后的培育瓶尽量防止笔直放置,一起瓶盖应扣放在超净作业台上,以削减落入细菌的机会。细胞培育物在处理和运用前,不要过早暴露于空气中。在进行搬运液体操作时,移液器不能触及瓶口以防止细菌污染或交叉污染。放置吸管时管口向下倾斜,以防止液体倒流引起污染。培育细胞的抛弃用品,应放入可封装的容器内。


  器件与试剂:1。眼科剪,弯镊子、手术刀;2。装有无血清培育液或PBS(KCl,2。7mM;KH2PO4,1。5mM;NaCl 136。9mM;Na2HPO4, 8。1mM)的小瓶; 3。10ml、50ml小烧杯;4。 培育皿。


  操作过程:


  采样时应严厉无菌操作。采样时使用已灭菌的器械、无菌包装的器皿和经过滤灭菌的缓冲溶液和培育液。采样过程中尽量防止紫外线照耀和触摸对细胞有毒害效果的化学试剂。在有污染要素存在的区域采样时,应将样品在含有500-1000U/ml的青、链霉素的PBS中漂洗3次,每次1-2分钟。


  在条件允许的状况下,宜采细胞易存活、增殖速度快的胚胎安排。


  采样时使用尖利的器械切碎安排,尽可能削减对细胞的机械损害。


  采样时应切除采样安排外的其它成份,如附着在采样安排上的血液、脂肪、神经安排、结缔安排和坏死安排。修剪和切碎过程中,应将样品浸泡于少数培育液中,以防止安排干燥。


  采纳的样品应赶快培育。因故不能当即培育时,应将样品切成1cm3以下的小块,浸泡于培育液内,置于冰浴或4℃冰箱中。时刻不能超过2小时。


  采样的一起要留好安排学标本和电镜标本,以便于今后辨别原代安排的来历和调查细胞体外培育后与原安排的差异性。对样品的来历、供体的一般状况(包含性别、年纪、健康状况等)要做具体的记载以备查询。

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